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公元653年。唐高宗皇位未稳急于用泰山封禅彰显皇威。自认血统高贵的安王李承道，卧薪尝胆图谋夺回皇位。李承道派死士暗中阻杀，泰山封禅在一场腥风血雨中惨淡收场。唐高宗在打击后一蹶不振不理朝政。郦贵妃为了制衡在后宫日益壮大的势力，决定让唐高宗把身处在感业寺中的武媚娘接回宫中。唐高宗借以感业寺修葺进香为名，带着官员们一起去寺里进香礼佛多少以挽回封禅受挫颜面，并顺道把武媚娘接回。狄仁杰带着家丁二宝，为躲避婚约尾随到长安述职的父亲。在父亲的引见下，狄仁杰与国丈爷刑部尚书王佑仁见面，狄仁杰这才发现王佑仁之子王元芳竟是当天在市集上遇到了纨绔公子哥。两人不打不相识，王元芳告诉狄仁杰感业寺最近闹鬼的传闻，约他一同前往探个究竟。却随即发生了一系列恐怖案件……成功破解感业寺疑云的狄仁杰得到唐高宗和武媚娘的欣赏与信任，狄仁杰与在寺中结识的李婉清互生情愫，而元芳与梦瑶也互生好感。几人决定四处游历。一路打打闹闹，也屡遇凶险，经历了鸢尾谷的亡灵案，孤岛魔影案，九天玄女童谣杀人案后，狄仁杰与元芳成为挚交好友，两对年轻人的情感也愈加浓烈。但敏感的狄仁杰却始终感觉到了李婉清对身世难以放下，以及身后一股神秘势力在暗中的蠢蠢欲动……
狄仁杰一行人来到了鸢尾谷，四少除了元芳以外对静秋姑娘都很有兴趣，李婉青问狄仁杰为什么静秋姑娘一直居住在鸢尾谷足不出谷，狄仁杰也不知道为什么，曾经小时候那次见过静秋以后，静秋就一直在鸢尾谷再也没有出来过。
静秋姑娘姗姗来迟，从进门的那个刹那，她的视线从狄仁杰的身上擦肩而过，狄仁杰也对她相识一笑，在弹琴过程中静秋姑娘的视线停留在狄仁杰的身上，童梦瑶和李婉青都觉得静秋姑娘对小时候的事情恋恋不忘，但是不可否认的是，静秋姑娘真是惊为天人，无论相貌和才华都是万中无一的。
不知道为什么长孙润泽一直迟迟不到，似乎所有人对他印象并不好都不想他参与其中。无论他在不在，京城四少之间的感情似乎都有问题，他们尔虞我诈，都不想让对方胜利，并且还互相嘲讽，京城四少这个名词有了些讽刺的意味。
静秋姑娘对月回忆，想起来了曾经和狄仁杰之间的点点滴滴，小时候狄仁杰曾经笑颜对静秋说等他长大了想要娶她为妻。三更时分，狄仁杰与静秋相见，静秋说他为什么会来，狄仁杰说姐姐从头到尾只用三根琴弦便是约她三更相见。两个人不约而笑，怀英问询为什么姐姐在鸢尾谷一住多年从未出去过，姐姐感叹一声，说这个鸢尾谷藏着太多的秘密。她细细道出多年前父亲被害，自己的娘内疚自尽的事情。静秋留在鸢尾谷这么多年只是为了想要求得真相，可是多年未果，她埋藏在心里的话不知道为什么只想对狄仁杰说，狄仁杰说自己会竭尽全力为了姐姐求得真相的。
狄父被秘密召回京城，皇帝说可能事变之时“道”未死，皇帝怀疑朝中重臣与其勾结，他派狄父秘密查探。
这时候，传来许子牧呼救声，大家问询赶来发现许子牧的房间里充满了毒蛇，幸亏李婉青机智拿出雄黄酒才帮助许子牧逃脱危机，但是狄仁杰觉得这件事没那么简单。京城四少互相怀疑，褚尚元并未出面他们都把怀疑转到了褚尚元的身上。